Thèse Rôle de la Protéine de Réplication a Rpa dans le Maintien des Télomères du Mécanisme Moléculaire aux Maladies Génétiques. H/F - Doctorat.Gouv.Fr

Établissement : Aix Marseille Université École doctorale : Recherches Biomédicales Laboratoire de recherche : CRCM - Centre de Recherche en Cancérologie de Marseille Direction de la thèse : Stéphane COULON ORCID 00000001809914X Début de la thèse : 2026-10-01 Date limite de candidature : 2026-05-05T23:59:59 Les télomères sont des structures importantes aux extrémités des chromosomes qui assurent des fonctions de protection. Chez les mammifères, ils sont composés de courtes séquences d'ADN répétées en tandem TTAGGG. Les séquences télomériques sont protégées par le complexe shelterine et allongées par la télomérase dans les cellules germinales et les cellules souches. En l'absence de mécanismes de maintenance des télomères, les chromosomes linéaires raccourcissent à chaque cycle de réplication de l'ADN, ce qui entraîne la sénescence réplicative ou l'apoptose. La réplication des télomères est donc une étape cruciale dans le maintien des extrémités des chromosomes, la stabilité du génome et la tumorigenèse.
Les défauts de maintenance des télomères entraînent un groupe de maladies génétiques rares et hétérogènes appelées téloméropathies. À ce jour, des mutations dans au moins 18 gènes impliqués dans la biologie des télomères ont été identifiées chez l'homme comme responsables de ces maladies. Récemment, notre consortium a identifié 10 variants monoalléliques rares dans les gènes RPA chez une cohorte de 250 familles présentant des symptômes inexpliqués de téloméropathie et des télomères courts. Le gène RPA2 code pour la sous-unité RPA2 qui forme, avec RPA1 et RPA3, le complexe de protéine de réplication A (RPA). La RPA est le principal facteur de liaison à l'ADN simple brin chez les eucaryotes qui joue un rôle essentiel dans le métabolisme de l'ADN. Au niveau des télomères, RPA participe à la réplication des répétitions télomériques et favorise l'action de la télomérase. Parmi les 10 variations, nous avons identifié une nouvelle variation hétérozygote germinale dans le gène RPA2 chez un patient suspecté d'être atteint de téloméropathie, présentant des symptômes d'insuffisance médullaire, d'ostéoporose et de télomères très courts. Il est intéressant de noter que cette variation est située dans un domaine structuré et que le résidu est hautement conservé chez les différentes espèces. Des tests in vitro ont révélé que cette mutation n'affecte pas l'activité de liaison à l'ADN du complexe RPA.
L'objectif de ce projet est d'évaluer l'impact de cette nouvelle variation de RPA2 sur l'intégrité des télomères et le maintien du génome. Pour cela, nous avons généré des lignées cellulaires knock-in CrisprCas9 portant cette nouvelle variation. Nous effectuerons d'abord un test de survie des cellules en présence ou en l'absence d'agents génotoxiques. La longueur des télomères sera évaluée par TRF (Telomeric Restriction Fragment). La stabilité des télomères sera évaluée par FISH télomérique sur des chromosomes en métaphase. Cela permettra de déterminer le pourcentage d'anomalies télomériques, notamment les pertes télomériques, les fusions télomériques, les sites multitélomériques, les chromosomes dicentriques,... Les foyers induits par un dysfonctionnement télomérique (TIF) dans les lignées cellulaires mutées pour RPA2 seront étudiés. Ces expériences nous permettront de caractériser les défauts de maintenance des télomères des lignées cellulaires déficientes en RPA2.Nous espérons mettre en lumière de nouvelles fonctions de la protéine RPA dans le maintien des télomères et la stabilité du génome. Cette étude offre un modèle humain unique de dysfonctionnement télomérique, bien que son rôle dans l'initiation tumorale et l'évolution somatique ne soit pas encore entièrement défini.
L'étudiant sera directement sous la responsabilité de Stéphane Coulon DR1-CNRS qui dirige l'équipe télomère au CRCM
Les modalité du suivi et de l'avancement se feront selon les régles de l'ED659 L'objectif de ce projet est d'évaluer l'impact de cette nouvelle variation de RPA2 sur l'intégrité des télomères et le maintien du génome.
Montrer que ce nouveau variant est à l'origine de téloméropathies L'étudiant travaillera en salle de culture cellulaire avec les cellules knock-in qui ont été générées. Découleront les expériences décrites ci dessus.

Nous recherchons un candidat sérieux, motivé, enthousiaste et rigoureux pour mener à bien ce projet de recherche